WKY大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎（EAG）模型誘導(dǎo)方案

WKY大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎（EAG）模型誘導(dǎo)方案

簡(jiǎn)介：

Goodpasture's syndrome綜合征是一種自身免疫性疾病，可引發(fā)急進(jìn)性腎小球（RPDN）和肺出血，其發(fā)病機(jī)制由針對(duì)腎小球和肺泡基底膜的自身抗體介導(dǎo)。IV型膠原作為腎小球基底膜（GBM）的主要成分，由五條α(IV)鏈[a1(IV)至a5(IV)]構(gòu)成。其中IV型膠原a3鏈的非膠原結(jié)構(gòu)域（a3(IV)NC1）被確認(rèn)為人類(lèi)Goodpasture's syndrome綜合征的主要抗原。

實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎（EAG）作為該綜合征的臨床模型，可通過(guò)以下抗原在Wistar Kyoto（WKY）大鼠中誘導(dǎo)：1)異源/同源GBM 2)IV型膠原NC1片段 3)純化牛源α3(IV)NC1 4)重組人源α3(IV)NC1及α4(IV)NC1 5)人源α3(IV)NC1合成肽段

研究證實(shí)，大鼠的Goodpasture's syndrome綜合征抗原定位于α3(IV)NC1和α4(IV)NC1。EAG還可通過(guò)轉(zhuǎn)移腎病WKY大鼠的自身抗體或α3(IV)NC1肽段特異性T細(xì)胞誘導(dǎo)于正常WKY大鼠，表明抗GBM抗體與抗原特異性T細(xì)胞在EAG發(fā)病機(jī)制中具有獨(dú)立作用。

Chondrex公司提供的牛源IV型膠原NC1片段（貨號(hào)1102，1mg）源自膠原酶溶解的牛GBM，可作為誘導(dǎo)WKY大鼠EAG的抗原之一。同時(shí)提供：

1）大鼠尿蛋白檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)9040）：用于EAG模型16小時(shí)尿總蛋白定量。

2）BPB蛋白檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)6026）：蛋白尿評(píng)估。

3）肌酐檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)6041）：用于蛋白尿/白蛋白尿數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化校正。

EAG模型誘導(dǎo)方案：

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用7-8周齡或更年長(zhǎng)的WKY大鼠。需注意：不同亞系、供應(yīng)商或飼養(yǎng)設(shè)施來(lái)源的WKY大鼠對(duì)EAG的敏感性存在差異。

2.抗原制備

將1瓶IV型膠原NC1片段（貨號(hào)1102，1mg）溶解于1ml 0.05M磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）中，配制成1mg/ml溶液。

3.乳化處理

將等體積的NC1片段溶液與CFA弗氏佐劑（貨號(hào)7008，含1mg/ml結(jié)核分枝桿菌）混合乳化。

注意事項(xiàng)：乳化穩(wěn)定性檢測(cè)：取1滴乳化液滴入燒杯水中。

合格標(biāo)準(zhǔn)：乳化液保持完整團(tuán)塊狀浮于水面不分散。

不合格處理：若乳化液在水面擴(kuò)散，需補(bǔ)加數(shù)滴佐劑重新乳化。

4. 免疫接種

初次免疫：于大鼠尾根部皮下注射0.2ml乳劑（含0.1mg NC1片段）

加強(qiáng)免疫（適用于低反應(yīng)性大鼠）：第7天，改用IFA弗氏佐劑（貨號(hào)7008）制備乳劑

劑量與部位同初次免疫。

注意：

不同供應(yīng)商來(lái)源的同一品系大鼠對(duì)腎炎易感性存在差異，研究者需根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化免疫方案（包括免疫周期和劑量）

5. EAG模型評(píng)估

觀察周期：建議持續(xù)觀察至第35天。

檢測(cè)方法：

每周進(jìn)行16小時(shí)蛋白尿檢測(cè)（推薦使用Chondrex大鼠尿蛋白檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)9040）。

典型病程：易感WKY大鼠通常在14-21天出現(xiàn)蛋白尿，21-28天達(dá)到蛋白尿峰值。

牛源NC1片段免疫誘導(dǎo)的WKY大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎

7 周齡雌性 WKY 大鼠，于第 0 天經(jīng)尾根部皮下注射 100μg 牛源 NC1 片段（cat#號(hào) 1102）與CFA弗氏佐劑（CFA，cat#7008，含 1 mg/ml 結(jié)核分枝桿菌）的乳化液。實(shí)驗(yàn)大鼠于第 10天出現(xiàn)蛋白尿，并持續(xù)至第 28 天。

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