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        當前位置:首頁產品中心DiacloneELISA Kit48T/96T/2X96T人白介素17A ELISA試劑盒

        人白介素17A ELISA試劑盒
        產品簡介:

        人白介素17A ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的白介素17A。

        產品型號:48T/96T/2X96T

        更新時間:2025-06-29

        廠商性質:代理商

        訪問量:1477

        服務熱線

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        產品介紹

        Human IL-17A ELISA Kit

         用途:人IL-17A ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的白介素17A。此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。

        檢測原理:

        IL-17A試劑盒應用的是夾心法固相酶聯免疫吸附分析法(ELISA)。IL-17A特異單克隆抗體被包被于微孔板上,已知IL-17A濃度的標準品和未知濃度的樣品可在此反應孔中進行檢測。先將IL-17A抗原和生物素標記IL-17A特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶,孵育后洗去未結合的酶。其后加入底物,產生顏色反應,顏色的深淺與樣品中IL-17A的濃度成一定的比例關系。

        試劑盒組成及配制:

         

        試劑(2-8保存)

        1x48孔的配置

        產品編號:#850.960.048

         

        配制

        96T微孔板

        1/2

        即用型(已包被)

        塑料板蓋

        2


        標準品:100pg/ml

        1瓶

        按瓶上的說明稀釋(見試劑制備,)

        標準品稀釋緩沖液

        1瓶(25ml

        即用型

        生物素標記IL-17A抗體

        1瓶(0.4ml)

        用生物素標記抗體稀釋液稀釋(見試劑制備)

        生物素標記抗體稀釋液

        1瓶(7ml)

        即用型

        親和素-HRP

        2瓶(5ul)

        0.5ml HRP稀釋液預稀釋(見試劑制備,)

        HRP稀釋液

        1瓶(23ml)

        即用型

        洗滌緩沖液

        1瓶(10ml)

        200x,蒸餾水稀釋(見試劑制備)

        TMB

        1瓶(11ml)

        即用型

        H2SO4終止液

        1瓶(11ml)

        即用型

         

        自備材料:

        蒸餾水;加樣器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器

        保存條件:

        試劑盒保存于2-8度,

        洗滌緩沖液:制備好后,2-8度可保存1周以上

        標準品:制備好后即用,不要保存。

        生物素標記二抗:制備好后即用,不要保存。

        親和素-HRP: 制備好后即用,不要保存。

        樣品收集,處理和保存:

        1.       細胞培養上清:1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

        2.       血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

        3.       EDTA,檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。

        4.       如果樣品不直接使用,將其分為小部分(250-500ul-70℃下保存,避免反復凍融。

        如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒,檢測前先離心或過濾。

        注意:不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

        檢測程序

        使用前,將所有試劑充分混合,不要使液體產生泡沫。根據樣品數量加上空白,標準品決定所需的板條,每個樣品,標準品,空白和質控都應做雙份。

        詳細步驟

        1

        制備標準曲線

        2

        按實驗方案在對應孔加入100ul標準品和樣本,標準品,樣本及空白孔均做復孔。

        3

        用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育2小時

        4

        去掉封板膜,按以下程序洗板:

        a.  吸出孔內液體。

        b.  每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液

        c.  吸出孔內液體

        d.  重復步驟bc兩次

        5

        加入50ul生物標記的IL-17A抗體到各孔

        6

        用封板膜,封板,室溫(18-25.℃)孵育1小時

        7

        重復步驟4

        8

        加入100ul親和素-HRP溶液到各孔

        9

        用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育30min

        10

        重復步驟4

        11

        加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔

        12

        室溫避光孵育5-15min,用鋁箔包住反應板,   避免光照。

        13

        加入100ul   H2SO4到各孔,終止反應。

        在分光光度計中讀取結果。450nm作為初始波長,630nm作為參考波長。

        結果分析

        以吸光度為Y軸,相應的IL-17A標準品濃度為X軸做標準曲線。樣品的IL-17A含量可根據其O.D.值由標準曲線推斷出來。


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