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        當前位置:首頁產品中心DiacloneELISA Kit人血管生成素2(Ang-2)ELISA試劑盒

        人血管生成素2(Ang-2)ELISA試劑盒
        產品簡介:

        人血管生成素2(Ang-2)ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的Ang-2含量,試劑盒可用于檢測天然和重組的人Ang-2,此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。

        產品型號:

        更新時間:2025-07-02

        廠商性質:代理商

        訪問量:783

        服務熱線

        01084640949

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        產品介紹

        人血管生成素2Ang-2ELISA試劑盒

        用途:人血管生成素2Ang-2ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的Ang-2含量,試劑盒可用于檢測天然和重組的人Ang-2,此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。

        檢測原理:

        Ang-2試劑盒應用的是夾心法固相酶聯免疫吸附分析法(ELISA)。Ang-2特異單克隆抗體被包被于微孔板上,已知Ang-2濃度的標準品和未知濃度的樣品可在此反應孔中進行檢測。先將Ang-2抗原和生物素標記Ang-2特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶,孵育后洗去未結合的酶。其后加入底物,產生顏色反應,顏色的深淺與樣品中Ang-2的濃度成一定的比例關系。

        試劑盒組成及配制:

         

        試劑(2-8保存)

        1x96孔的配置

        產品編號:#873.080.096

         

        配制

        96T微孔板

        1

        即用型(已包被)

        塑料板蓋

        2

        n/a

        Ang2標準品:4000pg/ml

        2

        按瓶上的說明稀釋(見試劑制備,)

        標準品稀釋緩沖液

        1瓶(25ml

        10X濃度,用純水稀釋

        生物素標記Ang2抗體

        1(0.4ml)

        用生物素標記抗體稀釋液稀釋(見試劑制備)

        生物素標記抗體稀釋液

        1(7ml)

        即用型

        親和素-HRP

        2(5ul)

        0.5ml HRP稀釋液預稀釋(見試劑制備,)

        HRP稀釋液

        1(23ml)

        即用型

        洗滌緩沖液

        1(10ml)

        200x,蒸餾水稀釋(見試劑制備)

        TMB

        1(11ml)

        即用型

        H2SO4終止液

        1(11ml)

        即用型

         

        自備材料:

        蒸餾水;加樣器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器

        保存條件:

        試劑盒保存于2-8度。

        1X 洗脫液:配好后,2-8,可保存一周。

        標準品稀釋液:配好后,2-8,可保存一周。

        稀釋后的標準品:稀釋后,立即使用,不易保存。

        生物素標記抗體:配好后,立即使用,不易保存。

        鏈親合素-HRP:配好后,立即使用,不易保存。

        樣品收集,處理和保存:

        1.       細胞培養上清:1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

        2.       血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

        3.       EDTA,檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。

        4.       如果樣品不直接使用,將其分為小部分(250-500ul-70下保存,避免反復凍融。

        如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒,檢測前先離心或過濾。

        注意:不要在3756加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

        檢測程序

        使用前,將所有試劑充分混合,不要使液體產生泡沫。根據樣品數量加上空白,標準品決定所需的板條,每個樣品,標準品,空白和質控都應做雙份。

        詳細步驟

        1

        制備標準曲線

        2

        按實驗方案在對應孔加入100ul標準品和樣本,標準品,樣本及空白孔,對照均做復孔。

        3

        加入50ul生物標記的Ang-2抗體到各孔

        4

        用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育1小時。

        5

        去掉封板膜,按以下程序洗板:

        a.  吸出孔內液體。

        b.  每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液

        c.  吸出孔內液體

        d.  重復步驟bc兩次

        6

        加入100ul親和素-HRP溶液到各孔

        7

        用封板膜,封板,室溫(18-25.℃)孵育30min

        8

        重復步驟5

        9

        加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔

        10

        室溫避光孵育10-15min,用鋁箔包住反應板,   避免光照。

        11

        加入100ul   H2SO4到各孔,終止反應。

        在分光光度計中讀取結果。450nm作為初始波長,620nm作為參考波長。

        注:制備的生物素標記抗Ang-2及親和素-HRP應立即使用。

        結果分析

        以吸光度為Y軸,相應的Ang-2標準品濃度為X軸做標準曲線。樣品的Ang-2含量可根據其O.D.值由標準曲線推斷出來。


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